产单核细胞李氏杆菌RPA-LF快速检测方法的建立

更新时间:2023-05-28

《中国兽医科学》2020年01期

【摘要】为建立一种基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)的快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法,以该菌溶血素基因hly为靶序列设计用于RPA试验的引物及探针。利用筛选到的引物和探针对RPA反应进行优化,结果表明RPA反应可在25～45℃较大温度范围内进行,10～25 min即可完成,其扩增产物在试纸条上仅需5 min即可获得检测结果。因此,在最佳反应温度(37℃)和最佳反应时间(15 min)条件下,RPA-LF总反应时间为20 min。该检测方法不与其他12种常见的食源性病原微生物发生交叉反应,对产单核细胞李氏杆菌基因组的最低检测限可低至400 pg。本研究中建立的产单核细胞李氏杆菌的RPA-LF检测方法具有检测时间短,反应灵敏,特异性好,结果直观,无须昂贵仪器等优点,可为后期产单核细胞李氏杆菌的现场检测应用打下坚实基础。

【关键词】产单核细胞李氏杆菌重组酶聚合酶扩增技术侧流层析快速检测